Коли потрібно швидко встановити групу крові, найчастіше вдаються саме до методу стандартних сироваток. Він не вимагає складного обладнання, дає результат уже за кілька хвилин і водночас будується на досить простому принципі: реакції між антитілами реагенту та антигенами, розташованими на поверхні еритроцитів.
Що лежить в основі методу
У крові людини в різних комбінаціях присутні аглютиніни та аглютиногени. Коли однойменні аглютиноген і аглютинін зустрічаються, виникає реакція аглютинації: однорідна пляма розпадається на численні дрібні плями, що складаються з еритроцитів, які склеїлися між собою. Саме цю реакцію й фіксують під час дослідження.
Існують два еритроцитні антигени (аглютиногени А і В) і два антитіла (а і b). Різні комбінації антигенів та антитіл утворюють чотири групи крові. Метод стандартних сироваток має перевагу: він дозволяє звести до одного численні вимірювання, а отже, швидше ухвалити рішення тоді, коли рахунок іде на хвилини.
Навіщо визначають групу крові
При наданні медичної допомоги не завжди вдається швидко зупинити кровотечу. Для переливання потрібне визначення групи крові та резус-фактора — без цього сумісність донора й реципієнта перевірити неможливо.
Метод стандартних сироваток застосовують частіше за інші методики, і причина тут не лише в швидкості. Реагенти порівняно доступні, а сама процедура не потребує дорогого устаткування, тому її можна провести і в невеликій лабораторії.
Як проводять визначення за стандартними сироватками
Дослідження виконують із реактивами, що містять аглютиніни різних груп, які вступають у реакцію з аглютиногенами на поверхні еритроцитів.
Щоб виявити групу крові, достатньо скористатися стандартними сироватками лише II і III груп. Однак для виключення можливих помилок з метою додаткового контролю використовують і інші — I та IV груп.
Виготовлення стандартних сироваток
Стандартні сироватки для визначення групи крові одержують із донорської крові. З цією метою використовують спеціальну систему: виділяють плазму разом з розташованими в ній антитілами, потім її розводять ізотонічним розчином натрію хлориду.
Поміщають 1 мл розчину NaCl 0,9 % у пробірку, додають плазму (1 мл), збовтують склад. Беруть 1 мл отриманої суміші, переносять в іншу пробірку з ізотонічним розчином.
Маніпуляцію повторюють, поки не отримають розведення суміші в пропорції 1:256. Інші розведення не використовують, щоб виключити виникнення помилки.
Кольорове маркування флаконів
Для одного дослідження групи крові за допомогою стандартних сироваток їх потрібно три — по дві серії для кожної групи. Вони відрізняються за кольором:
- I (0) — прозора рідина, флакон забезпечений білою етикеткою;
- II (А) — рідина блакитна, флакон з двома смугами синього кольору;
- III (В) — блідо-рожева рідина, флакон з трьома рожевими смужками;
- IV (АВ) — жовта рідина, на етикетці флакона чотири жовті смужки.
На етикетках зазначено термін придатності та дані про виробника. Ці позначки варто перевіряти до початку роботи: прострочений реагент дає слабку реакцію й може призвести до хибного висновку.
Умови проведення дослідження
Температура в приміщенні має бути в межах +15…+25 °С, потрібне гарне освітлення. Використовують спеціальний планшет, який має області з позначками. На нього наносять кожну сироватку: беруть два зразки, один з них — контрольний, другий — для діагностики.
Потім поряд з кожною краплею сироватки розміщують краплю крові, змішуючи її з кожним окремо реагуючим розчином. Через кілька хвилин (5–6) аналізують отримані дані:
- якщо відбувається реакція аглютинації — сироватковий тест вважається позитивним;
- при відсутності аглютинації тест негативний.
Як розшифрувати результати
У разі позитивного результату еритроцити склеюються — у реагуючому розчині утворюються червоні згустки. Якщо колір розчину не змінився, реакція вважається негативною.
Є закономірності, що залежать від комбінацій негативних і позитивних реакцій, які відбуваються в розчинах:
| Група крові | Комбінація реакцій |
|---|---|
| I (0) | ні в одному зразку немає позитивної реакції |
| II (А) | у зразку II (А) стан не змінився, а в двох інших виявилася позитивна реакція |
| III (В) | тільки в зразку III (В) реакція виявилася негативною |
| IV (АВ) | у кожному з трьох зразків реакція виявилася позитивною |
Поява інших комбінацій пов’язана з погрішностями, що виникають при дослідженні. Використання старих реактивів або неправильне проведення аналізу може супроводжуватися слабкою реакцією. У таких випадках з метою уточнення необхідно зробити тести з використанням інших методик.
Що варто враховувати на практиці
Метод стандартних сироваток дає надійний результат лише за сукупності умов: свіжі реагенти з чітким маркуванням, дотримана температура, достатнє освітлення й акуратне змішування кожної краплі окремо. Контрольні зразки тут не формальність — саме вони допомагають помітити розбіжність і не покладатися на сумнівний висновок.
Визначення групи крові не зводиться до одного тесту. Резус-фактор встановлюють окремо, а перед переливанням обов’язково проводять пробу на сумісність. Тому результати, отримані методом стандартних сироваток, завжди підтверджують додатковими способами, якщо йдеться про реальну клінічну ситуацію.
