Визначення групи крові по стандартним сироваткам використовується часто (у порівнянні з іншими методиками). В основі даної техніки — містяться в крові агглютинины і агглютиногены в різних комбінаціях.
З’єднання однойменних агглютиногена і агглютинина супроводжується реакцією аглютинації (однорідне пляма розпадається на численні дрібні плями, що складаються з еритроцитів, склеившихся між собою).
Суть методу
При наданні медичної допомоги не завжди вдається швидко зупинити кровотечу, для переливання потрібна визначення групи крові, резус-фактора.
Існують 2 эритроцитных антигену (агглютиногены А і В) і 2 антитіла (а і b). Різні комбінації антигенів і антитіл утворюють 4 групи крові.
Даний спосіб має переваги, оскільки дозволяє звести до одного численні вимірювання.
Методика визначення показників
Визначення груп крові по стандартним сироваткам проводиться з використанням реактивів, що містять агглютинины різних груп, що вступають у реакцію з агглютиногенами, що знаходяться на поверхні еритроцитів.
Щоб виявити групу крові, достатньо скористатися стандартними сироватками лише II і III груп. Однак для виключення можливих помилок з метою додаткового контролю використовують і інші (I і IV груп).
Виготовлення сироватки
Стандартні сироватки для визначення групи крові одержують із донорської крові. З цією метою використовують спеціальну систему: виділяють плазму разом з розташованими в ній антитілами, потім її розводять ізотонічним розчином хлориду натрію.
Поміщають 1 мл розчину NaCl 0,9% в пробірку, додають плазму (1 мл), збовтують складу. Беруть 1 мл отриманої суміші, переносять в іншу пробірку з ізотонічним розчином.
Маніпуляцію повторюють, поки не отримають розведення суміші в пропорції 1:256. Інші розведення не використовують, щоб виключити виникнення помилки.
Для одного дослідження групи крові за допомогою стандартних сироваток їх потрібно 3 (2 серій для кожної групи), що відрізняються за кольором:
- I (0) — прозора рідина, флакон забезпечений білою етикеткою;
- II (А) — рідина блакитна, флакон з 2 смугами синього кольору;
- III (В) — блідо-рожева рідина, флакон з 3 рожевими смужками;
- ІV(АВ) — жовта рідина, на етикетці флакона 4 жовті смужки.
На етикетках зазначено:
- титр;
- термін придатності;
- дата випуску;
- серійний номер.
- дані про виробника.
Проведення дослідження
Температура в приміщенні повинна бути в межах +15…+ 25°С, потрібно гарне освітлення.
Використовують спеціальний планшет, який має області з позначками. На нього наносять кожну сироватку (беруть 2 зразка, 1 з них — контрольний, 2 — для діагностики).
Потім поряд з кожною краплею сироватки розміщують краплю крові, змішуючи з кожним окремо реагує розчином. Через кілька хвилин (5-6) аналізують отримані дані:
- якщо відбувається реакція аглютинації — сироватковий тест вважається позитивним;
- при відсутності аглютинації тест негативний.
Результати дослідження
У разі позитивного результату еритроцити склеюються (в реагуючому розчині утворюються червоні згустки).
Якщо колір розчину не змінився, реакція вважається негативною. Є закономірності, що залежать від комбінацій негативних і позитивних реакцій, що відбуваються в розчинах:
- I(0), якщо ні в одному зразку немає позитивної реакції;
- II (А), якщо в зразку II (А) стан не змінилося, а в 2 інших виявилася позитивна реакція;
- ІІІ(В), якщо тільки в зразку III(В) реакція виявилася негативною;
- ІV(АВ), якщо в кожному з 3 зразків реакція виявилася позитивною.
Поява інших комбінацій пов’язано з погрішностями, що виникають при дослідженні.
Використання старих реактивів або неправильне проведення аналізу може супроводжуватися слабкою реакцією. В таких випадках з метою уточнення необхідно зробити тести з використанням інших методик.
